组培室由实验准备室(培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养皿灭菌)、无菌操作室和控制培养室组成。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的,拥有净工作台、电子分析天平、精密移液器、高压灭菌锅、体视显微镜、光照培养箱、生化培养箱、空调、冰箱等设备。
组培室设计原则为:
1、防止污染,控制住污染,就等于组织培养成功了一半;组培净化车间的结构和布局合理,工作方便、节能、安全;按照工艺流程科学设计、经济、实用和创新。 组培净化车间选址要求避开污染源;
(资料图片仅供参考)
2、组培净化车间建造时,应采用产灰尘量较少的建筑材料;墙壁、天花板、地面的交界宜做成弧形,便于日常清洁;洗手池、下水道的位置要适宜,不得对培养环境造成污染,下水道开口位置应对组培车间的洁净度影响小,并有避免污染的措施;
3、设置防止昆虫、鸟类、鼠类等动物进入的措施;管道要尽量暗装,安排好暗敷管道的走向,便于日后的维修并能确保在维修时不造成污染。
4、组培净化车间接种室、培养室的装修材料必须经得起消毒、清洁和冲洗,并设置能确保与其洁净度相应的控温控湿的设施;组培车间的电源应由部门设计、安装并经验证合格之后方可使用,应有备用电源,确保停电或掉电时能继续操作。
1.准备室:
进行一切与实验有关的准备工作,完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。
要求:好有25平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备,方便多人同时工作;同时要求通风条件好,便于气体交换;实验室地面应便于清洁,并应进行防滑处理。
设备:准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱(放置培养容器)、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。
2、洗涤灭菌室
完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。
要求:洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小,一般面积控制在25平方米。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2个水槽,用于清洗小型玻璃器皿,地面应耐湿并 排水良好。
设备:水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、声波清洗器、干燥灭菌器等。
3、缓冲间
是进入无菌室前的一个缓冲场地,减少人体从外界带入的尘埃等污染物。工作人员在此换上工作服、拖鞋,戴上口罩,才能进入无菌室和培养室。 进入无菌操作室前在此更衣换鞋,以减少进出时带入接种室杂菌。
要求:缓冲间需5-10平方米,可建在准备室外或无菌操作室外,应保持清洁无菌;备有鞋架和衣帽挂钩,并有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服;墙顶用1-2盏紫外灯定时照射,对衣物进行灭菌。 缓冲间好也安一盏紫外线灭菌灯,用以照射灭菌。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。
设备:1-2盏紫外灯、水槽、实验台、鞋帽架、柜子、灭菌后的工作服、拖鞋、口罩。
4、无菌操作室(接种室)
也叫接种室,主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序,是植物离体培养研究或生产中关键的一步。
要求:接种室宜小不宜大,一般10平方米,其规模根据实验需要和环境控制的难易程度而定。要求封闭性好,干爽安静,清洁明亮,能较长时间保持无菌,因此不易设在容易受潮的地方;地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑,易于清洁和消毒;配置拉动门,以减少开关门时的空气扰动;为便于消毒处理,地面及内墙壁都应采用防水和耐腐蚀材料;为了保持清洁,无菌室应防止空气对流。接种室要求在适当位置吊装 1~2盏紫外线灭菌灯,用以照射灭菌。好安装一小型空调,使室温可控,这样可使门窗紧闭,减少与外界空气对流。 一般新建实验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处理,处理方法是甲醛和高锰酸钾熏蒸,并需定期灭菌处理,还可用紫外线照射1-2h/周,或每次使用前照射10-30min。
设备:紫外灯、空调、解剖镜、消毒器、酒精灯、接种器械(接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针),实验台、和搁架,还有净工作台和整套灭菌接种仪器、药品等。
5、培养室
对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养,无论是研究性实验室还是生产性实验材料进行培养的场所。要求:约需 20-30平方米左 右,培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定,其设计以充分利用空间和节省能源为原则。基本要求是能够控制光照和温度,并保持相对的无菌环境,因此,培养室应保持清洁和适度干燥;为满足植物培养材料生长对气体的需要,还应安装排风窗和换气扇等培养室的换气装置;为节省能源和空间,应 配置适宜的培养架,并安装日光灯照明。
研究用实验室,通常可根据光照时间设置成长日照、中日照、短日照培养室,也可以根据温度设置成高温和低温培养室,每一个培养室的空间不宜过大,便于对条件的均匀控制。进行精细培养类型如细胞培养和原生质体培养,可采用光照培养箱或人工气候箱代替培养室。
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